Repozitorijum Hemijskog fakulteta - Cherry
Univerzitet u Beogradu - Hemijski fakultet
    • English
    • Српски
    • Српски (Serbia)
  • Srpski (latinica) 
    • Engleski
    • Srpski (ćirilica)
    • Srpski (latinica)
  • Prijava
Pregled rada 
  •   Repozitorijum Hemijskog fakulteta - Cherry
  • Hemijski fakultet
  • Radovi
  • Pregled rada
  •   Repozitorijum Hemijskog fakulteta - Cherry
  • Hemijski fakultet
  • Radovi
  • Pregled rada
JavaScript is disabled for your browser. Some features of this site may not work without it.

Optimization of the heterologous expression of banana glucanase in Escherichia coli

Optimizacija heterologe proizvodnje glukanaze iz banane u E. coli

Thumbnail
2012
1244.pdf (664.3Kb)
Autori
Abughren, Mohamed
Popović, Milica
Dimitrijevic, Rajna
Burazer, Lidija
Grozdanovic, Milica
Atanaskovic-Markovic, Marina
Gavrović-Jankulović, Marija
Članak u časopisu (Objavljena verzija)
Metapodaci
Prikaz svih podataka o dokumentu
Apstrakt
For the heterologous production of a banana glucanase in Escherichia coli, its gene (GenBank GQ268963) was cloned into a pGEX-4T expression vector as a fusion protein with glutathione-S-transferase (GST). BL21 cells transformed with the GST-Mus a 5 construct were employed for production of the protein induced by 1 mM isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The conditions for protein expression were optimized by varying the temperature (25, 30 and 37 C) and duration of protein expression (3, 6 and 12 h). The level of protein production was analyzed by densitometry of the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAG) after electrophoretic resolution of the respective cell lysates. The optimal protein expression for downstream processing was obtained after 12 h of cell growth at 25 degrees C upon addition of IPTG. Recombinant GST-Mus a 5 purified by glutathione affinity chromatography revealed a molecular mass of about 60 kDa. The IgE and IgG reactivity of the rGST-Mus a 5 wa...s confirmed by dot blot analysis with sera of individual patients from subjects with banana allergy and polyclonal rabbit antibodies against banana extract, respectively. The purified recombinant glucanase is a potential candidate for banana allergy diagnosis.

Za potrebe proizvodnje u Escherichia coli gen glukanaze iz banane (GenBank GQ268963) je ukloniran u ekspresioni vektor pGEX-4T sa glutation-S-transferazom (GST). Proizvodnja ovog proteina u ćelijama je indukovana 1 mM izopropil-β-D-tiogalaktopiranozidom (IPTG). Uslovi za ekspresiju proteina su optimizovani variranjem temperature (25, 30 i 37°C) i dužine trajanja proteinske sinteze (3, 6 i 12 h). Nivo proizvodnje proteina je analiziran denzitometrijom SDS-PA gela nakon elektroforetskog razdvajanja ćelijskih lizata. Optimalna proizvodnja proteina za njegovo dalje procesovanje je dobijena gajenjem ćelija nakon dodatka IPTG na 25°C tokom 12 h. Rekombinantni GST-Mus a 5 prečišćen afinitetnom hromatografijom sa glutationom pokazuje molekulsku masu od 60 kDa. IgE i IgG reaktivnost izolovane glukanaze potvrđena je u 'dot blot' sa pojedinačnim serumima osoba alergičnih na bananu, i sa poliklonskim zečijim antitelima na ekstrakt banane, redom. Prečišćena rekombinantna glukanaza je potencijalan k...andidat za dijagnozu alergije na bananu.

Ključne reči:
food allergen / protein expression / protein expression / glucanase / glucanase
Izvor:
Journal of the Serbian Chemical Society, 2012, 77, 1, 43-52
Izdavač:
  • Serbian Chemical Soc, Belgrade
Projekti:
  • Alergeni, antitela, enzimi i mali fiziološki značajni molekuli: dizajn, struktura, funkcija i značaj (RS-172049)

DOI: 10.2298/JSC110309158A

ISSN: 0352-5139

WoS: 000300386100005

Scopus: 2-s2.0-84858634561
[ Google Scholar ]
URI
http://cherry.chem.bg.ac.rs/handle/123456789/1246
Kolekcije
  • Radovi
Institucija
Hemijski fakultet

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
O Cherry repozitorijumu | Pošaljite zapažanja

OpenAIRERCUB
 

 

Kompletan repozitorijumInstitucijeAutoriNasloviTemeOva institucijaAutoriNasloviTeme

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
O Cherry repozitorijumu | Pošaljite zapažanja

OpenAIRERCUB