Optimizacija postupka pripreme uzoraka seruma u metabolomičkom ispitivanju

Abstract

Metabolomička ispitivanja proučavaju molekule supstanci koje su uključene u metaboličke odgovore na patofiziološke promene izazvane ekspresijom gena ili hemijskim agensima. Pored boljeg razumevanja fizioloških i patofizioloških metabolomičkih puteva, saznanja dobijena metabolomičkim ispitivanjima značajno doprinose razvoju dijagnostičkih metoda u kliničkoj praksi, omogućavaju uspešnije praćenje delotvornosti odabranih terapija u lečenju pacijenata i mogu se primeniti prilikom istraživanja i ispitivanja novih lekova. Cilj ovog rada je optimizacija postupka pripreme uzoraka seruma za metabolomička ispitivanja primenom NMR spektroskopije i detekcija najprisutnijih metabolita u reprezentativnom uzorku seruma. U cilju optimizacije postupka pripreme uzoraka seruma za metabolomička ispitivanja, u radu je ispitano taloženje/uklanjanje makromolekula u reprezentativnom uzorku seruma sa rastvaračima: etanolom, acetonom, trihlorsićetnom kiselinom i smešom rastvarača metanol/voda/ hloroform (4:3:1). Efikasnost taloženja makromolekula i potencijalno moguća okluzija metabolita od interesa, utvrđena je izvođenjem 1H NMR eksperimenata sa različitim pulsnim sekvencma (zg30, zgpr, cpmg i stebpgp1). NMR rezultati dobijeni za različito pripremljene uzorke poređeni su međusobno kao i sa reprezentativnim uzorkom seruma razblaženim deuterisanom vodom. Kao najpogodniji način pripreme uzorka seruma za metabolomička ispitivanja pokazalo se taloženje makromolekula sa trihlorsićetnom kiselinom. Koriščenjem ovako razvijenog načina pripreme reprezentativnog uzorka pomoću NMR spektroskopije identifikovano je ukupno deset metabolita: alanin, valin, treonin, tirozin, triptofan, guanin, laktat, mravlja kiselina, D-glukoza i saharoza.