Heterologna ekspresija i prečišćavanje mutanta I297T peroksidaze iz rena izoforme C1A u kvascu Pichia pastoris KM71H

Abstract

U ovom radu je pPICZA vektor sa ukloniranim mutiranim genom za peroksidazu iz rena, kom je uvedena mesto specifična mutacija iz aminokiseline izoleucin na poziciji 297 u aminokiseinu treonin, korišten za transformaciju ćelija Pichia pastoris KM71H, koje su zatim podvrgnute fermentaciji kako bi se u ekstracelularnom medijumu (fermentacionoj tečnosti) eksprimirao mutirani enzim peroksidaze iz rena. Eksprimirani enzim peroksidaze iz rena je iz fermentacione tečnosti prečišćen na DEAE matriksu, pomoću HPLC instrumenta. Da li je uvedena mutacija dovela do poboljšanja u enzimskoj aktivnosti peroksidaze iz rena testirano je ABTS supstrat esejem, a dobijeni rezultati su poređeni sa enzimskom aktivnosti „divljeg soja“ enzima peroksidaze iz rena.