Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija
Само за регистроване кориснике
2021
Мастер/магистарски рад (Објављена верзија)
,
Univerzitet u Beogradu - Hemijski fakultet
Метаподаци
Приказ свих података о документуАпстракт
S obzirom na navedene potencijalne primene S2 domena, važno je osmisliti i optimizovati
rekombinantnu proizvodnju ovog antigena. Rekombinantna tehnologija pruža mogućnosti
jednostavne i standardizovane proizvodnje proteina, a u zavisnosti od odabranog ekspresionog
sistema, mogu je karakterisati visoki prinosi i brza i jeftina proizvodnja. U tom smislu se najčešće
koristi E. coli kao ekspresioni sistem. Korišćenje ovog ekspresionog sistema odlikuju brojne
prednosti. E. coli je odlično okarakterisana, optimizovane su metode genetske manipulacije i
protein je često moguće dobiti u velikim količinama i relativno brzo. Medjutim, postoje i mane, a
jedna od njih je činjenica da bakterije nisu sposobne za uvodjenje postranslacionih modifikacija
poput glikana.
S2 domen je u prirodi visoko glikozilovan, što nije moguće rekreirati u bakterijama. To može
imati posledice na rastvorljivost rekombinantnog S2 proteina, kao i na njegov nivo ekspresiju. U
prethodnim preliminarnim istraživanji...ma je pokazano da je rekombinantni S2 protein zaista teško
eksprimirati u solubilnom obliku i da većina proteina završava u inkluzionim telima.
Iz tog razloga je u ovom radu bio cilj klonirati gen za S2 ektodomen (S2Ec) u pGEX-4T-1 vektor
radi dodavanja GST taga na N terminus, te proveriti uticaj GST taga na solubilnost eksprimiranog
proteina, kao i na uticaj taga na sam nivo ekspresije. Cilj je dalje bio protein prečistiti i testirati ga
u imunoblot eksperimentima u cilju provere potencijala antigena u detekciji antitela i pogodnosti
korišćenja istog u serološkim testovima.
Кључне речи:
SARS-CoV-2 / Escherichia coli / imunohemijska karakterizacija / rekombinantna tehnologijaИзвор:
2021, 1-47Колекције
Институција/група
Hemijski fakultet / Faculty of ChemistryTY - THES AU - Bisenić, Aleksandar D. PY - 2021 UR - https://cherry.chem.bg.ac.rs/handle/123456789/4625 AB - S obzirom na navedene potencijalne primene S2 domena, važno je osmisliti i optimizovati rekombinantnu proizvodnju ovog antigena. Rekombinantna tehnologija pruža mogućnosti jednostavne i standardizovane proizvodnje proteina, a u zavisnosti od odabranog ekspresionog sistema, mogu je karakterisati visoki prinosi i brza i jeftina proizvodnja. U tom smislu se najčešće koristi E. coli kao ekspresioni sistem. Korišćenje ovog ekspresionog sistema odlikuju brojne prednosti. E. coli je odlično okarakterisana, optimizovane su metode genetske manipulacije i protein je često moguće dobiti u velikim količinama i relativno brzo. Medjutim, postoje i mane, a jedna od njih je činjenica da bakterije nisu sposobne za uvodjenje postranslacionih modifikacija poput glikana. S2 domen je u prirodi visoko glikozilovan, što nije moguće rekreirati u bakterijama. To može imati posledice na rastvorljivost rekombinantnog S2 proteina, kao i na njegov nivo ekspresiju. U prethodnim preliminarnim istraživanjima je pokazano da je rekombinantni S2 protein zaista teško eksprimirati u solubilnom obliku i da većina proteina završava u inkluzionim telima. Iz tog razloga je u ovom radu bio cilj klonirati gen za S2 ektodomen (S2Ec) u pGEX-4T-1 vektor radi dodavanja GST taga na N terminus, te proveriti uticaj GST taga na solubilnost eksprimiranog proteina, kao i na uticaj taga na sam nivo ekspresije. Cilj je dalje bio protein prečistiti i testirati ga u imunoblot eksperimentima u cilju provere potencijala antigena u detekciji antitela i pogodnosti korišćenja istog u serološkim testovima. T1 - Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija SP - 1 EP - 47 UR - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4625 ER -
@mastersthesis{ author = "Bisenić, Aleksandar D.", year = "2021", abstract = "S obzirom na navedene potencijalne primene S2 domena, važno je osmisliti i optimizovati rekombinantnu proizvodnju ovog antigena. Rekombinantna tehnologija pruža mogućnosti jednostavne i standardizovane proizvodnje proteina, a u zavisnosti od odabranog ekspresionog sistema, mogu je karakterisati visoki prinosi i brza i jeftina proizvodnja. U tom smislu se najčešće koristi E. coli kao ekspresioni sistem. Korišćenje ovog ekspresionog sistema odlikuju brojne prednosti. E. coli je odlično okarakterisana, optimizovane su metode genetske manipulacije i protein je često moguće dobiti u velikim količinama i relativno brzo. Medjutim, postoje i mane, a jedna od njih je činjenica da bakterije nisu sposobne za uvodjenje postranslacionih modifikacija poput glikana. S2 domen je u prirodi visoko glikozilovan, što nije moguće rekreirati u bakterijama. To može imati posledice na rastvorljivost rekombinantnog S2 proteina, kao i na njegov nivo ekspresiju. U prethodnim preliminarnim istraživanjima je pokazano da je rekombinantni S2 protein zaista teško eksprimirati u solubilnom obliku i da većina proteina završava u inkluzionim telima. Iz tog razloga je u ovom radu bio cilj klonirati gen za S2 ektodomen (S2Ec) u pGEX-4T-1 vektor radi dodavanja GST taga na N terminus, te proveriti uticaj GST taga na solubilnost eksprimiranog proteina, kao i na uticaj taga na sam nivo ekspresije. Cilj je dalje bio protein prečistiti i testirati ga u imunoblot eksperimentima u cilju provere potencijala antigena u detekciji antitela i pogodnosti korišćenja istog u serološkim testovima.", title = "Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija", pages = "1-47", url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4625" }
Bisenić, A. D.. (2021). Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija. , 1-47. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4625
Bisenić AD. Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija. 2021;:1-47. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4625 .
Bisenić, Aleksandar D., "Rekombinantna proizvodnja GST-tagovanog S2 ektodomena SARS-CoV-2 u E. coli i imunohemijska karakterizacija" (2021):1-47, https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4625 .