Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli
Authorized Users Only
2021
Bachelor Thesis (Published version)

Univerzitet u Beogradu - Hemijski fakultet
Metadata
Show full item recordAbstract
Humani α-sinuklein je protein zastupljen u završecima presinaptičkih neurona. Agregati ovog proteina su pronađeni u okviru amiloidnih fibrila i Lewy-jevih tela u mozgovima pacijenata sa Alchajmerovom, Parkinsonovom i drugim bolestima i smatra se da su usko povezani sa etiologijom ovih bolesti. Da bi se ispitale priroda ovog proteina i njegove oligomerizacije in vitro potrebne su velike količine prečišćenog proteina. U ovom radu opisana je konstrukcija vektora za ekspresiju humanog α-sinukleina fluorescentno obeleženog mCerulean3 proteinom sa His6, odnosno His8 tagom i uvedenim proteolitičkim mestom za TEV proteazu, koji nakon digestije oslobađa α-sinuklein sa nativom N-terminalnom aminokiselinom, a polazeći od komercijalno dostupnog pDUET-A- α-sinuclein-mCerulean3 vektora. Za dobijanje ekspresionog konstrukta, prvo je sintetisan insert PCR-om iz više ciklusa, nakon čega su PCR proizvodi subklonirani u pET-20b vektor, a zatim prebačeni u pDUET vektor. Sekvenca inserta u dobijenim kons...truktima je potvrđena sekvenciranjem sa opdgovarajućim prajmerima.
Keywords:
kloniranje / bakterija / Escherichia coli / α-sinuklein / α-sinukcleinSource:
2021, 1-69Funding / projects:
- LEAPSyn-SCI - Late Embryogenesis Abundant Proteins: Structural Characterisation and Interaction With Α-Synuclein (RS-6039663)
Collections
Institution/Community
Hemijski fakultet / Faculty of ChemistryTY - THES AU - Savić, Aleksa D. PY - 2021 UR - https://cherry.chem.bg.ac.rs/handle/123456789/4736 AB - Humani α-sinuklein je protein zastupljen u završecima presinaptičkih neurona. Agregati ovog proteina su pronađeni u okviru amiloidnih fibrila i Lewy-jevih tela u mozgovima pacijenata sa Alchajmerovom, Parkinsonovom i drugim bolestima i smatra se da su usko povezani sa etiologijom ovih bolesti. Da bi se ispitale priroda ovog proteina i njegove oligomerizacije in vitro potrebne su velike količine prečišćenog proteina. U ovom radu opisana je konstrukcija vektora za ekspresiju humanog α-sinukleina fluorescentno obeleženog mCerulean3 proteinom sa His6, odnosno His8 tagom i uvedenim proteolitičkim mestom za TEV proteazu, koji nakon digestije oslobađa α-sinuklein sa nativom N-terminalnom aminokiselinom, a polazeći od komercijalno dostupnog pDUET-A- α-sinuclein-mCerulean3 vektora. Za dobijanje ekspresionog konstrukta, prvo je sintetisan insert PCR-om iz više ciklusa, nakon čega su PCR proizvodi subklonirani u pET-20b vektor, a zatim prebačeni u pDUET vektor. Sekvenca inserta u dobijenim konstruktima je potvrđena sekvenciranjem sa opdgovarajućim prajmerima. T1 - Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli SP - 1 EP - 69 UR - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4736 ER -
@misc{ author = "Savić, Aleksa D.", year = "2021", abstract = "Humani α-sinuklein je protein zastupljen u završecima presinaptičkih neurona. Agregati ovog proteina su pronađeni u okviru amiloidnih fibrila i Lewy-jevih tela u mozgovima pacijenata sa Alchajmerovom, Parkinsonovom i drugim bolestima i smatra se da su usko povezani sa etiologijom ovih bolesti. Da bi se ispitale priroda ovog proteina i njegove oligomerizacije in vitro potrebne su velike količine prečišćenog proteina. U ovom radu opisana je konstrukcija vektora za ekspresiju humanog α-sinukleina fluorescentno obeleženog mCerulean3 proteinom sa His6, odnosno His8 tagom i uvedenim proteolitičkim mestom za TEV proteazu, koji nakon digestije oslobađa α-sinuklein sa nativom N-terminalnom aminokiselinom, a polazeći od komercijalno dostupnog pDUET-A- α-sinuclein-mCerulean3 vektora. Za dobijanje ekspresionog konstrukta, prvo je sintetisan insert PCR-om iz više ciklusa, nakon čega su PCR proizvodi subklonirani u pET-20b vektor, a zatim prebačeni u pDUET vektor. Sekvenca inserta u dobijenim konstruktima je potvrđena sekvenciranjem sa opdgovarajućim prajmerima.", title = "Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli", pages = "1-69", url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4736" }
Savić, A. D.. (2021). Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli. , 1-69. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4736
Savić AD. Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli. 2021;:1-69. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4736 .
Savić, Aleksa D., "Kloniranje fluorescentno obeleženog humanog α-sinukleina u vektore za ekspresiju u bakteriji Escherichia coli" (2021):1-69, https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_cherry_4736 .