Optimizacija uslova ekstrakcije i kvantifikacija tropomiozina kozica ELISA metodom

Abstract

Morski plodovi su česti uzročnici alergija širom svijeta koje mogu imati i fatalan ishod. Stoga, u cilju njihove prevencije neophodna je detekcija i kvantifikacija alergena, kao i redukcija njihove alergenosti. Termalno procesovanje hrane je jedan od načina smanjenja alergenosti, ali problem je stabilnost određenih proteina na visokim temperaturama, među kojima je i tropomiozin. Riječ je o glavnom termostabilnom alergenu rakova. U ovom radu su optimizovani uslovi ekstrakcije ukupnih proteina zapadno-pacifičkih kozica (lat. Solenocera melantho). Dobijen je uvid u uspješnost ekstrakcije određivanjem koncentracije ukupnih proteina i upoređivanjem elektroforetskih profila. Tropomiozin i ostali alergeni kozica su detektovani Western blotom, a u cilju osjetljive kvantifikacije tropomiozina u ekstraktima razvijen je i ELISA test. Takođe, ispitana je ukrštena reaktivnost tropomiozina iz morskih plodova i iz grinja Western blotom.